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My CartCAS：850140-73-7
Storage：Powder:2-8℃，2 years;Insolvent(Mother Liquid):-20℃，6 months;-80℃，1 year
Purity：≥98%
Appearance：White to yellow Solid
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| CAS | 850140-73-7 |
| Name | Afatinib Dimaleate |
| Molecular Formula | C24H25ClFN5O3·2C4H4O4 |
| Molecular Weight | 717.18 |
| Solubility | Soluble in DMSO ≥5mg/mL |
| Purity | ≥98% |
| Appearance | White to yellow Solid |
| Storage | Powder:2-8℃，2 years;Insolvent(Mother Liquid):-20℃，6 months;-80℃，1 year |
| EC | EINECS 810-416-1 |
| MDL | MFCD25974239 |
| SMILES | O=C(NC1=C(C=C2C(C(NC3=CC(Cl)=C(C=C3)F)=NC=N2)=C1)O[C@H]4CCOC4)/C=C/CN(C)C.O=C(O)/C=C\C(O)=O.O=C(O)/C=C\C(O)=O |
| Target Point | EGFR |
| Passage | Angiogenesis;Protein Tyrosine Kinase/RTK; JAK/STAT Signaling |
| Background | Afatinib Dimaleate is an irreversible EGFR/HER2 inhibitor. |
| Biological Activity | Afatinib dimaleate是不可逆的 EGFR 家族抑制剂，抑制EGFRwt，EGFRL858R，EGFRL858R/T790M 和 HER2的 IC50 分别为0.5 nM，0.4 nM，10 nM 和 14 nM。[1-2] |
| In Vitro | 在无细胞体外激酶测定中，Afatinib(BIBW2992)dimaleate显示出对抗EGFR和HER2的野生型和突变形式的有效活性，类似于吉非替尼对L858R EGFR的效力，但对抗吉非替尼抗性的活性约高100倍。 L858R-T790M EGFR双突变体，IC50为10 nM。此外，BIBW2992与拉帕替尼和卡那替尼相比具有抗HER2的体外效力，IC50为14nM。该评估中最敏感的激酶是lyn，IC50为736 nM [1]。 Afatinib是这些ErbB家族受体的不可逆抑制剂。食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞系对Afatinib敏感，IC50浓度在较低的微摩尔范围内(孵育48小时：HKESC-1 = 78 nM，HKESC-2 = 115 nM，KYSE510 =3.182μM，SLMT-1 =4.625μM，EC-1 =1.489μM;孵育72小时：HKESC-1 = 2 nM，HKESC-2 = 2 nM，KYSE510 =1.090μM，SLMT-1 =1.161μM，EC-1 = 109 nM)最大生长抑制超过95％。 Afatinib可以剂量和时间依赖的方式强烈诱导HKESC-2和EC-1中的G0 / G1细胞周期停滞[2]。 |
| In Vivo | 一旦治疗开始，阿法替尼(15mg / kg)强烈抑制HKESC-2肿瘤的生长。车辆的平均肿瘤大小和终点处理分别为348±24 mm3和108±36 mm3，两者之间存在显著差异。显然，在Afatinib给药结束后，肿瘤大小不会在短时间内反弹。在整个治疗过程中体重没有快速变化表明Afatinib的毒性很小，这种药物耐受性良好[2]。 |
| Cell Experiment | 将人ESCC细胞系EC-1，HKESC1和HKESC2，SLMT1和KYSE510在含有10％胎牛血清(FBS)的RPMI中培养。使用MTT通过比色测定评估细胞毒性。将肿瘤细胞在各孔培养基中的48孔板(每孔3000-8000个细胞)中培养。在细胞铺板后24小时加入完全培养基中的阿法替尼，并在37℃，5％CO 2下培养48和72小时。细胞生长抑制表示为用酶标仪在570nm处测量的对照培养物的吸光度百分比，并且通过GraphPad PRISM计算50％的最大生长抑制(IC 50)。在每个实验中，对于每种药物浓度(n = 3)进行一式三份孔，并且在三个独立实验中重复测定[2]。 |
| Animal Experiment | 小鼠[2]使用体重约16-20克的六周龄雌性无胸腺裸鼠(nu / nu)。通过将HKESC-2(重悬于50μLHBSS缓冲液中的6×104细胞)皮下接种到裸鼠的两侧，建立ESCC异种移植物。当肿瘤大小达到4-6mm直径时，它们在治疗(15mg / kg)或载体对照组中随机化。用于治疗的阿法替尼通过在给药前溶解在0.5％甲基纤维素中来制备。通过口服强饲法将药物或媒介物以5天的时间表给予小鼠，加上2天，连续两周。通过用卡尺监测肿瘤大小的变化来评估药物功效。用公式肿瘤体积=(宽度2×长度)/ 2计算肿瘤体积。 |
| Kinase Experiment | 感染后72小时，用HEPEX(20mM HEPES pH 7.4，100mM NaCl，10mMβ-甘油磷酸盐，10mM对硝基苯基磷酸盐，30mM NaF，从Sf9生物质中提取EGFR激酶结构域-GST融合蛋白，5 mM EDTA，5％甘油，1％Triton X-100，1 mM Na3VO4，0.1％SDS，0.5μg/ mL胃蛋白酶抑制剂A，抑肽酶20 KIU / mL，Leupeptin2μg/ mL，苯甲脒1 mM，2.5μg/ mL 3，4-二氯异香豆素，2.5μg/ mL反式环氧琥珀酰基-L-亮氨酰-L-酰氨基丁烷和0.002％PMSF)并用于测定IC 50值。每个100μL酶反应在50％Me2SO中含有10μLAfatinib(BIBW2992)，20μL底物溶液(200 mM HEPES pH 7.4，50 mM Mg-acetate，2.5 mg / mL poly(EY)，5μg/ mL bio -pEY)和20μL酶制剂。通过加入50μL在10mM MgCl 2中制备的100μMATP溶液开始酶促反应。测定在室温下进行30分钟，并通过加入50μL终止溶液(在20mM HEPES pH 7.4中的250mM EDTA)终止。将100μL转移至链霉抗生物素蛋白包被的微量滴定板，在室温下孵育60分钟后，用200μL洗涤溶液(50mM Tris，0.05％Tween20)洗涤板。向孔中加入100μL等份的HRPO标记的抗PY抗体(PY20H Anti-Ptyr：HRP，由Transduction Laboratories提供)250ng / mL。孵育60分钟后，将板用200μL洗涤溶液洗涤三次。然后用100μLTMB过氧化物酶溶液(A：B = 1：1)显色样品。 10分钟后停止反应。将板转移至ELISA读数器并在OD 450nm下测量消光。所有数据点一式三份执行[1]。 |
| Data Literature Source | [1]. Li D，et al. BIBW2992，an irreversible EGFR/HER2 inhibitor highly effective in preclinical lung cancer models. Oncogene. 2008 Aug 7;27(34):4702-11. [2]. Wong CH，et al. Preclinical evaluation of afatinib (BIBW2992) in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). Am J Cancer Res. 2015 Nov 15;5(12):3588-99 |
| Unit | Bottle |
| Specification | 5mg 10mg |
是不可逆的 EGFR/HER2抑制剂。
Remark：These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.
Note：
1. The products are all for scientific research use only. Do not use it for medical, clinical diagnosis or treatment, food and cosmetics, etc. Do not store them in ordinary residential areas.
2. For your safety and health, please wear laboratory clothes, disposable gloves and masks.
3. The experimental results may be affected by many factors, after-sale service is limited to the product itself and does not involve other compensation.
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